NY/T 4660-2025 猫嵌杯病毒感染诊断技术

国家标准《猫嵌杯病毒感染诊断技术》总结

一、标准概述

• ​​标准号​​：NY/T 4660-2025
• ​​归口单位​​：全国动物卫生标准化技术委员会（SAC/TC181）
• ​​起草单位​​：上海市动物疫病预防控制中心、中国农科院上海兽医研究所等。
• ​​适用范围​​：适用于猫科动物（如猫、虎、狮等）感染猫嵌杯病毒（FCV）的临床诊断和实验室检测，涵盖病毒分离、荧光RT-RAA、RT-PCR和实时荧光RT-PCR等方法。

二、流行病学与临床诊断

1. ​​流行病学特征​​

   • ​​易感动物​​：幼龄猫科动物最易感，通过呼吸道、消化道及污染物传播。
   • ​​流行季节​​：全年可发，春秋季高发。

2. ​​临床症状​​

   • ​​典型症状​​：口腔溃疡（显著特征）、结膜炎、上呼吸道症状（喷嚏、流涎）、发热（39.5℃~40.5℃）。
   • ​​全身性症状（VSD）​​：面部/四肢水肿、出血性肺炎、黄疸，致死率高。

3. ​​病理变化​​

   • 肺实变、间质性肺炎、支气管积液，全身感染可见皮下水肿及多器官坏死。

4. ​​鉴别诊断​​

   • 需与猫疱疹病毒I型（眼部症状）、猫衣原体病（结膜炎）、支原体病（慢性支气管炎）等区分。
   • ​​疑似病例判定​​：符合流行病学特征，且出现≥2种典型症状及病理变化。

三、样品采集与处理

1. ​​样品类型​​

   • 全血、血清、病变组织（肺、肝、脾）、眼/鼻咽拭子、细胞培养物。

2. ​​采集与保存​​

   • 全血/血清：EDTA抗凝或静置析出血清，4℃保存≤24h，长期保存需-70℃。
   • 组织样品：研磨后加抗生素处理，过滤除菌。
   • 拭子：置于50%甘油缓冲液中，离心取上清。

3. ​​运输要求​​：冰袋或干冰密封，8小时内送达实验室。

四、实验室诊断方法

1. ​​病毒分离与鉴定​​

   • ​​细胞系​​：F81猫肾传代细胞。
   • ​​操作流程​​：接种样品→37℃培养观察CPE（细胞圆缩、脱落）→盲传三代。
   • ​​鉴定​​：出现CPE后，通过分子检测确认。

2. ​​荧光RT-RAA法​​

   • ​​靶基因​​：FCV保守区，引物/探针特异性设计。
   • ​​反应条件​​：39℃扩增30循环，FAM荧光检测。
   • ​​判定​​：Ct≤28为阳性；28<Ct<30需复检。

3. ​​RT-PCR法​​

   • ​​扩增片段​​：955bp，简并引物覆盖变异毒株。
   • ​​电泳判定​​：阳性对照出现特异性条带。

4. ​​实时荧光RT-PCR​​

   • ​​探针设计​​：FAM标记，BHQ1淬灭。
   • ​​判定​​：Ct≤35为阳性；35<Ct<40需复检。

五、综合判定

1. ​​确诊病例​​：临床疑似病例+任一分子检测阳性。
2. ​​无症状感染​​：分子检测阳性需病毒分离验证。

六、附录关键信息

• ​​临床参考图​​：口腔溃疡、眼鼻分泌物、细胞病变（CPE）。
• ​​试剂配制​​：PBS、细胞培养基、胰酶等详细配方。
• ​​检测示意图​​：RT-PCR电泳条带（955bp）、荧光扩增曲线示例。

七、意义与实施

• 该标准为FCV感染的早期诊断、疫情控制提供技术规范，尤其对高致病性毒株（VSD）的检测具有重要价值。实验室操作需符合生物安全要求（GB19489），确保结果准确性。