NY/T 4679-2025 饲料中硫酸黏菌素的测定 液相色谱-串联质谱法

中华人民共和国农业行业标准 NY/T 4679-2025 主要内容总结

一、标准更新要点

1. ​​代替文件​​：取代农业部2086号公告6-2014，主要技术变更包括：
   • 调整适用范围（涵盖配合饲料、浓缩饲料等四类饲料）
   • 更新硫酸黏菌素标准品（黏菌素A和B的纯度要求≥98%）
   • 改进提取溶剂为5%草酸溶液，增加正己烷除脂步骤
   • 优化液相色谱梯度洗脱程序（缩短分析时间至5分钟）
   • 扩展标准曲线范围（20-5000 ng/mL）
   • 修订数据处理公式，明确双组分加和计算
   • 提升精密度要求（绝对差值≤15%）

二、方法核心原理

• ​​提取​​：5%草酸超声提取，正己烷液液分配去脂
• ​​净化​​：HLB固相萃取柱（500mg/6mL）净化，甲醇洗脱
• ​​检测​​：LC-MS/MS（C18色谱柱，梯度洗脱，ESI+模式，MRM监测）
• ​​定量​​：基质匹配外标法（黏菌素A定量离子对390.7→384.8，B为386.2→380.2）

三、关键参数指标

• ​​灵敏度​​：
  • 检出限：0.02 mg/kg
  • 定量限：0.1 mg/kg
• ​​线性范围​​：20-5000 ng/mL（相关系数r≥0.99）
• ​​精密度​​：重复测定差值≤15%
• ​​回收率验证​​：通过基质加标实验验证（标准未明确数值）

四、实验操作要点

1. ​​样品制备​​：

   • 粉碎过0.425mm筛，基质空白需无目标物干扰
   • 称样量2g（精确至0.001g）

2. ​​提取流程​​：

   • 20mL 5%草酸溶液涡旋+超声提取
   • 8000r/min离心后，10mL正己烷去脂

3. ​​净化步骤​​：

   • HLB柱活化（甲醇→甲酸溶液）
   • 上样后依次用甲酸溶液、水淋洗，甲醇洗脱
   • 氮吹浓缩至近干，乙腈-0.2%甲酸复溶

4. ​​仪器条件​​：

   • ​​液相色谱​​：
     • 梯度：初始95%A相（0.2%甲酸水），3分钟内切换至90%B相（0.2%甲酸甲醇）
     • 流速0.3mL/min，柱温40℃
   • ​​质谱​​：
     • 毛细管电压1.5kV，离子源温度120℃
     • 脱溶剂温度340℃，碰撞气氩气29L/h

五、质量控制要求

• ​​定性确认​​：
  • 保留时间偏差≤±2.5%
  • 离子丰度比符合表3允许偏差（如>50%丰度允许±20%偏差）
• ​​定量验证​​：
  • 单点校准时，样品与标准峰面积差异≤30%
  • 双组分分别计算后加和（w=w1+w2）

六、注意事项

• ​​标准品配制​​：
  • 黏菌素A需折算为硫酸盐形式（9.24mg相当于10mg硫酸黏菌素A）
  • 储备液-18℃保存，有效期6个月
• ​​基质效应控制​​：
  • 必须使用同类型饲料制备基质匹配标准
  • 标准溶液氮吹后复溶需完全转移

七、附录支持

• 提供200 ng/mL基质标准溶液的典型色谱图（黏菌素B保留时间约2.2min，A约2.8min）

该标准系统优化了前处理方法与仪器条件，显著提升检测效率与准确性，适用于饲料中硫酸黏菌素的痕量检测，为监管非法添加提供可靠技术依据。