NY/T 548-2025 猪传染性胃肠炎诊断技术

中华人民共和国农业行业标准 NY/T 548-2025《猪传染性胃肠炎诊断技术》总结

​​一、标准概述​​

• ​​替代版本​​：NY/T 548-2015，主要更新内容包括新增检测方法（间接免疫荧光法、实时荧光RT-PCR）、优化ELISA试验、删除常量血清中和试验等。
• ​​适用范围​​：适用于猪传染性胃肠炎（TGE）的诊断与监测，涵盖临床诊断、实验室检测及综合判定。

​​二、临床诊断​​

1. ​​流行病学特征​​：
   • 四季可发，冬春高发，潜伏期短（18h-3d），传播迅速。
   • 哺乳仔猪死亡率高（100%），病猪、带毒猪为主要传染源，粪-口、气溶胶传播。
2. ​​临床症状​​：
   • 仔猪：呕吐、水样腹泻、脱水；成年猪：厌食、轻度腹泻；母猪：体温升高、泌乳减少。
3. ​​病理变化​​：
   • 消化道病变（胃黏膜充血、小肠壁变薄），肠绒毛萎缩（组织学特征，见附录A）。
   • ​​结果判定​​：符合流行病学且满足临床症状或病理变化者，判为疑似病例，需实验室确诊。

​​三、实验室诊断方法​​

​​1. 样品采集与处理​​

• ​​采集类型​​：粪便（1-2mL）、小肠及内容物（结扎两端）。
• ​​处理步骤​​：振荡离心取上清液，保存于-20℃（详见第7章）。

​​2. 病毒分离与鉴定​​

• ​​细胞系​​：PK15或ST细胞。
• ​​步骤​​：接种样品后观察细胞病变（CPE），盲传2-3代。
• ​​鉴定依据​​：CPE特征（细胞圆缩、脱落），结合直接/间接免疫荧光法或RT-PCR确诊（第8章）。

​​3. 免疫学检测​​

• ​​直接免疫荧光法（DIFA）​​：
  • 荧光标记抗体检测病毒抗原，胞浆绿色荧光判阳性（第9章，附录D）。
• ​​间接免疫荧光法（IDIFA）​​：
  • 二抗标记检测抗体，结合DAPI染核（第10章，附录E）。
• ​​双抗体夹心ELISA​​：
  • 包被抗体捕获病毒抗原，计算P/N值≥2为阳性（第11章）。
• ​​间接ELISA​​：
  • 重组N蛋白包被，S/P值≥0.35判阳性（第15章，附录J）。

​​4. 分子生物学检测​​

• ​​RT-PCR​​：
  • 扩增TGEV特异性片段（1417bp），电泳检测（第12章，附录H）。
• ​​实时荧光RT-PCR​​：
  • 检测S基因（109bp），Ct值≤30判阳性（第13章，附录I）。

​​5. 血清中和试验​​

• 检测中和抗体效价，≥1:8判阳性（第14章）。

​​四、综合判定标准​​

1. ​​确诊TGE​​：临床疑似病例+任一实验室检测阳性（病毒分离、荧光法、PCR等）。
2. ​​潜伏感染​​：无症状但RT-PCR或实时荧光RT-PCR阳性。
3. ​​既往感染​​：非免疫猪血清中和试验或间接ELISA阳性。

​​五、生物安全与试剂配制​​

• ​​生物安全​​：按GB 19489执行，涉及活病毒操作需二级生物安全实验室。
• ​​试剂配制​​：详细规范PBS、细胞培养液、荧光染色液等（附录B、G）。

​​六、附录内容​​

• ​​病理与检测图示​​：肠绒毛萎缩、细胞病变、荧光检测结果（附录A、C、D、E、H、I）。
• ​​实验操作指南​​：病毒RNA提取、重组N蛋白表达（附录J）、引物序列及电泳条件。

​​七、主要更新亮点​​

1. ​​新增方法​​：间接免疫荧光法、实时荧光RT-PCR，提升检测灵敏度。
2. ​​优化流程​​：调整ELISA步骤，删除冗余试验（如常量中和试验）。
3. ​​标准化判定​​：明确综合判定逻辑，区分确诊、潜伏感染与既往感染。

​​总结​​：NY/T 548-2025全面规范了TGE的诊断流程，整合传统病理学、免疫学与分子生物学技术，强化实验室检测的准确性与效率，为猪场疫病防控提供了科学依据。