NY/T 4680-2025 饲料中6种大环内酯类驱虫药的测定 液相色谱-串联质谱法

中华人民共和国农业行业标准 NY/T 4680-2025 主要内容总结

​​1. 标准修订要点​​

• ​​替代文件​​：取代农业部1486号公告52010，首次修订。
• ​​主要更新​​：
  • ​​新增检测药物​​：扩展至6种大环内酯类驱虫药（原仅阿维菌素类），包括阿维菌素、乙酰氨基阿维菌素、伊维菌素、多拉菌素、莫西克丁、米尔贝肟。
  • ​​适用范围调整​​：覆盖配合饲料、浓缩饲料、精料补充料及添加剂预混合饲料。
  • ​​方法优化​​：
    • ​​提取液​​：乙腈替代原方法溶剂。
    • ​​净化流程​​：增加正己烷液液分配及HLB固相萃取柱净化步骤。
    • ​​仪器条件​​：更新液相色谱梯度程序及质谱参数（锥孔电压、碰撞能）。
  • ​​精密度要求​​：两次独立测定结果绝对差值≤15%（原未明确数值）。

​​2. 检测核心信息​​

• ​​原理​​：乙腈提取→正己烷液液分配净化→HLB柱固相萃取→LC-MS/MS检测（外标法定量）。
• ​​检测限与定量限​​：

  药物	检出限（μg/kg）	定量限（μg/kg）
  阿维菌素、乙酰氨基阿维菌素、伊维菌素、多拉菌素	10	25
  莫西克丁、米尔贝肟	25	50

​​3. 关键实验步骤​​

• ​​样品制备​​：
  • 粉碎过0.425mm筛，取200g混匀，基质空白需无干扰峰。
• ​​提取​​：
  • 称2g试样，乙腈涡旋振荡提取两次，离心合并上清液。
• ​​净化​​（分两类饲料）：
  • ​​配合饲料/浓缩饲料​​：正己烷去脂→氮吹浓缩→水稀释→HLB柱净化。
  • ​​其他饲料​​：正己烷去脂→氮吹浓缩→直接HLB柱净化。
  • ​​HLB柱流程​​：乙腈-淋洗液I活化→过柱→淋洗液I/II淋洗→甲醇洗脱。
• ​​基质匹配标准溶液​​：空白基质处理后加标，避免基质效应。

​​4. 仪器条件​​

• ​​液相色谱​​：
  • 色谱柱：C18柱（50mm×2.1mm, 1.7μm）。
  • 流动相：A相（0.3%甲酸水）-B相（甲醇），梯度洗脱（0-6min，B相85%→97%→85%）。
  • 流速0.2mL/min，柱温40℃，进样量5μL。
• ​​质谱参数​​：
  • ESI正离子模式，多反应监测（MRM）。
  • 关键离子对及能量（示例）：

    药物	定量离子对（m/z）	锥孔电压（V）	碰撞能（eV）
    阿维菌素B1a	895.67→327.40	70	60
    莫西克丁	640.30→199.10	30	25

​​5. 数据与结果​​

• ​​定性要求​​：
  • 保留时间偏差≤±2.5%。
  • 离子丰度比偏差符合表3（如>50%丰度允许±20%偏差）。
• ​​定量方法​​：
  • 基质匹配标准曲线（R²≥0.99）或单点校准（峰面积差异≤30%）。
  • 计算公式（多点校准）：

    w_i = /frac{c_i /times V_1 /times V /times n}{V_2 /times m /times 1000}

  • 结果保留三位有效数字。

​​6. 附录信息​​

• ​​附录A​​：6种药物的中英文名称、分子式及CAS号（如阿维菌素B1a，CAS 65195-55-3）。
• ​​附录B​​：基质匹配标准溶液色谱图示例（10ng/mL），标注各药物出峰顺序及定量离子。

​​7. 适用场景​​

• ​​检测对象​​：饲料生产商、质检机构、畜牧养殖企业。
• ​​应用意义​​：确保饲料中驱虫药残留符合安全标准，保障动物源性食品安全。