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SN/T 5765-2025 海参及其制品鉴定方法 DNA条形码技术

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资料介绍

  中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

  SN/T 5765—2025

  海参及其制品鉴定方法DNA 条形码技术

  Identification protocol for sea cucumber and its

  products— DNA barcode

  2025-07-25 发布2026-02-01 实施

  中华人民共和国海关总署发 布

  前 言

  本文件按照 GB/T 1.1— 2020《标准化工作导则 第1 部分:标准化文件的结构和起草规则》的规

  定起草。

  请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

  本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。

  本文件起草单位:中华人民共和国青岛海关、临沂大学、深圳海关动植物检验检疫技术中心。

  本文件主要起草人:尹伟力、梁君妮、魏玮、刘云国、杨柏、张静、史青、郑晓聪、刘荭。

  1

  海参及其制品鉴定方法 DNA 条形码技术

  1. 范围

  本文件规定了楯手目(Aspidochirotida)和芋参目(Molpadida)海参及其制品DNA 条形码技术的

  鉴定方法。

  本文件适用于对新鲜、冷冻、干制的海参及其制品进行海参物种或成分鉴定。

  2. 规范性引用文件

  下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文

  件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适

  用于本文件。

  GB /T 6682 分析实验室用水规格和试验方法

  GB/T 27401 实验室质量控制规范 动物检疫

  GB/T 27403 实验室质量控制规范 食品分子生物学检测

  3. 术语和定义

  下列术语和定义适用于本文件。

  3.1

  DNA 条形码 DNA barcode

  生物体内能够代表该物种的、标准的、有足够变异的、易扩增且相对较短的DNA 片段。

  注:本文件中指海参线粒体基因组中的COI 基因片段。

  3.2

  空白对照 blank control

  从基因组DNA 提取步骤开始至PCR 扩增和PCR 产物检测整个过程,没有加入任何海参源性成

  分的空白灭菌洁净去离子水,与其他受试的样品平行进行操作以观察实验是否处于正常状态。空白对

  照没有PCR 产物条带产生。

  3.3

  阳性对照 positive control

  在PCR 扩增过程中,与受试样品平行进行的对照反应,以在正常反应情况下一定能产生PCR 产

  物的DNA 为反应模板,用于观察整个反应体系和反应过程是否正常。阳性对照应有PCR 产物带产生。

  3.4

  阴性对照 negative control

  非海参样品的其他物种样品,与受试样品平行进行的对照反应,用于观察整个反应体系是否正

  常,确认没有受到污染。阴性对照没有PCR 产物条带产生。

  2

  4. 缩略语

  下列缩略语适用于本文件。

  cDNA :互补DNA(Complementary DNA)。

  COI :线粒体细胞色素c 氧化酶亚基Ⅰ(Mitochondrial cytochrome c oxidase subunit I,COI)。

  CTAB :十六烷基三甲基溴化铵(cetyltrimethylammonium bromide)。

  DEPC :焦碳酸二乙酯(Diethylpyrocarbonate)。

  dNTP :脱氧核苷三磷酸(Deoxy-ribonucleoside triphosphate)。

  EDTA :乙二胺四乙酸( Ethylenediaminetetraacetic acid )。

  PBS :磷酸盐缓冲盐水(Phosphate buffered saline)。

  PCR :聚合酶链反应(Polymerase chain reaction)。

  TBE :缓冲液(tris-borate-EDTA buffer)。

  Tris :三(羟甲基)氨基甲烷[tris (hydroxymethyl) aminomethane]。

  5. 原理

  本文件利用通用引物对海参物种线粒体COI 进行PCR 扩增,得到目的片段进行纯化、测序。之

  后经序列比对分析其同源性,根据同源性来确定物种之间的关系。

  6. 仪器和试剂

  6.1 仪器

  电子天平、低温高速离心机(转速≥ 12 000 r/min)、恒温水浴锅、纯水器、PCR 扩增仪、电泳仪、

  电泳槽、凝胶成像仪、微量移液器(10 μL~100 μL 和100 μL~1 000 μL)、普通冰箱和超低温冰箱、微

  量核酸蛋白测定仪。

  6.2 试剂

  6.2.1 试剂级别

  除另有规定外,试验用水应符合GB/T 6682 中三级水的要求,所用化学试剂均为分析纯。

  6.2.2 引物

  上游引物序列(COIef):5’-ATAATGATAGGAGGRTTTGG-3’

  下游引物序列(COIer):5’-GCTCGTGTRTCTACRTCCAT-3’

  6.2.3 其他试剂

  冰乙醇、异丙醇、三氯甲烷、蛋白酶K(20 mg/mL)、RNAase(10 mg/mL)、乙酸钠(3 mol/L)、

  Taq DNA 聚合酶(5 U/μL)、MgCl2(25 mmol/L)、dNTPs(10 mmol/L)、PCR buffer(10×)、琼脂糖、

  标准分子量(2 000 bp)。

  7. 样品采集和处理

  7.1 鲜海参、即食海参直接剪取肌肉柱,用于DNA 提取。

  3

  7.2 取1 只~ 2 只干海参放入无菌器皿中,加入500 mL 无菌水,4 ℃条件冷藏12 h ~ 24 h,直至海

  参泡软,剪取肌肉柱,用于DNA 提取。

  7.3 混匀海参口服液,用于DNA 提取。

  8. 实验步骤

  8.1 设立对照

  阳性对照:使用任意一种楯手目或芋参目的海参样品。

  阴性对照:使用非海参样品的其他物种样品。

  空白对照:没有加入任何海参源性成分的空白灭菌洁净去离子水。

  阳性对照样品和阴性对照样品需和待检样品同时进行DNA 提取。

  8.2 DNA 提取

  8.2.1 鲜海参、干海参DNA 提取

  8.2.1.1 称取100 mg 海参肌肉柱,冲洗干净,用无菌纸吸干,切碎或置液氮研碎,置于1.5 mL 离心

  管中。加入400 μL 裂解液Ⅰ(见附录A 中A.1)和12 μL 20 mg/mL 蛋白酶K 溶液(见A.2),混匀,

  置于55 ℃水浴中5 h ~ 8 h,期间不时轻微震动混匀。

  8.2.1.2 待组织消化完全,冷却至室温。

  8.2.1.3 加入600 μL 三氯甲烷,混合 3 min,静置7 min,12 000 r/min 离心2 min。

  8.2.1.4 将上清液转移至另一洁净的1.5 mL 离心管中,加入500 μL 三氯甲烷,颠倒混合2 min,

  12 000 r/min 离心2 min。

  8.2.1.5 将上清液转移至另一洁净的1.5 mL 离心管中,加入500 μL 沉淀液Ⅰ(见A.3)混匀,静置

  2 min。

  8.2.1.6 12 000 r/min 离心 10 min ~ 20 min,弃上清液,留沉淀。

  8.2.1.7 加入200 μL 氯化钠溶液(见A.4),轻轻混匀至DNA 完全溶解,再加入6 μL RNA 酶,置于

  37 ℃下30 min ~ 60 min。

  8.2.1.8 加入1 mL 冰乙醇和100 μL 乙酸钠溶液(见A.5),-20 ℃下放置10 min,中间混匀一次,

  12 000 r/min 离心10 min。

  8.2.1.9 弃上清液,加入1 mL 70%冰乙醇清洗,12 000 r/min 离心5 min。将沉淀于无菌空气中晾干,

  加入20 μL 去离子水溶解沉淀,置于4 ℃备用。若需长期保存应置于-20 ℃以下保存。

  也可采用经验证同等效果的DNA 提取纯化试剂盒进行核酸提取,参照说明书使用。

  8.2.2 海参口服液DNA 提取

  8.2.2.1 取10 mL 海参口服液, 加入6 mL 异丙醇和1 mL 乙酸钠( 见A.5),-20 ℃ 沉淀2 h,

  12 000 r/min 离心10 min,留沉淀。

  8.2.2.2 在沉淀中加入600 μL裂解液Ⅱ(见A.6),6 μL蛋白酶K 溶液(见A.2 ),置于55 ℃水浴中1 h,

  期间不时轻微震动混匀。

  8.2.2.3 10 000 r/min 离心2 min,取上清液。在上清液中加入500 μL 三氯甲烷,混合2 min,10 000 r/min

  离心2 min,取上清液。

  8.2.2.4 在上清液中加入2 倍体积的沉淀液Ⅱ(见A.7),混合均匀,静置1 h ~ 2 h,

  8.2.2.5 12 000 r/min 离心5 min。弃上清液,吸尽残留液,加入100 μL 氯化钠溶液(见A.4),混合

  均匀,直至DNA 完全溶解。

  8.2.2.6 加入6 μL RNA 酶,55 ℃放置10 min。加入100 μL 三氯甲烷,混合2 min,10 000 r/min 离心

  4

  2 min。取上清液。

  8.2.2.7 加入1 mL 冰乙醇和100 μL 乙酸钠溶液(见A.5),混合均匀,-20 ℃放置10 min,中间混匀

  一次,12 000 r/min 离心5 min,弃上清液,吸干残液。

  8.2.2.8 沉淀中加入1 mL 70% 冰乙醇,12 000 r/min 离心2 min,弃上清液,吸干残液,37 ℃放置

  10 min,加入20 μL 去离子水溶解沉淀,置于4 ℃备用。若需长期保存应置于-20 ℃以下。

  8.2.3 DNA 浓度和纯度的测定

  吸取DNA 提取液 2 μL,以去离子水作为空白对照,使用微量核酸蛋白测定仪或紫外分光光度计

  测定DNA 模板的浓度及260 nm 和 280 nm 处的吸光值 A260 和 A280。DNA 的浓度按公式(1)计算:

  c=A×N×50… ……………………………………………(1)

  式中:

  c ——DNA 浓度,单位为纳克每微升(ng/μL);

  A ——260 nm 外的吸光值;

  N ——核酸稀释倍数。

  当A260/A280 比值在1.7 ~ 1.9 之间,浓度大于 1 ng/μL 时,可以进行PCR 扩增。

  8.4 PCR 扩增

  8.4.1 PCR 反应体系

  每个反应总体积为50 μL,包含10×PCR 缓冲液5 μL,MgCl2(25 mmol/L)3 μL, dNTP(10 mmol/L)

  1 μL,上下游引物(10 μmol/L)各1 μL,Taq DNA 聚合酶(5 U/μL)1 μL,模板DNA 1 μL 以及去离

  子水37 μL。根据样品数量配制反应液,分装到各PCR 反应管中,之后分别加入提取的样品、阴性对

  照和阳性对照 DNA 模板,空白对照。盖紧管盖后混匀,瞬时离心 5 s ~ 10 s。

  8.4.2 反应参数

  94 ℃ 预变性5 min;94 ℃ 变性 1 min,50 ℃ 退火1 min,72 ℃ 延伸2 min,35 个循环;72 ℃延

  伸10 min。4 ℃保存。

  8.5 琼脂糖电泳分析

  用1×TBE 电泳缓冲液(见A.8)配制含有溴化乙锭(1 μg/mL)(见A.9)的2%(质量浓度)琼

  脂糖凝胶,取5 μL 扩增产物和溴酚蓝指示剂按比例混匀后进行电泳检测,DNA 分子标记同步电泳。

  用凝胶成像仪或紫外透射仪观察,拍照记录结果。

  8.6 序列测定和比对

  将PCR 扩增结果阳性产物进行序列测定,测序后的结果在GenBank 或BOLD 进行检索比对。8

  种海参基因参考序列见附录B。

  9. 结果判断

  9.1 有效性原则

  以下条件应同时满足,否则本次实验不成立:

  ——空白对照:无特异性条带;

  ——阴性对照:无特异性条带;

  5

  ——阳性对照:有692 bp 的特异性扩增条带 。

  9.2 结果判断和表述

  9.2.1 PCR 扩增结果阳性

  PCR 扩增产物,经琼脂糖凝胶电泳,可见692 bp 的特异性条带,将扩增产物按照 8.6 的方法进

  行测序和同源性比对分析,判断海参的种类:

  ——同源性> 98.0% 且与某物种(如日本仿刺参)序列同源性最高,则判定为“含有某种海参(如

  日本仿刺参)成分”;

  ——同源性≤ 98.0%,则判定为“含有楯手目、芋参目海参成分,但不能进行海参种类的判定”。

  9.2.2 PCR 扩增结果阴性

  PCR 扩增产物,经琼脂糖凝胶电泳,未见692 bp 的特异性条带,则判定样品不含楯手目、芋参

  目海参成分。

  6

  附 录 A

  (规范性)

  试剂配制

  A.1 裂解液Ⅰ

  1 mol/L Tris-HCl (pH 7.5) 0.5 mL

  10 % CTAB 15 mL

  NaCl 5.844 g

  0.1 mol/L EDTA 1.5 mL

  定容至100 mL。

  A.2 蛋白酶K 溶液(20 mg/mL)

  将200 mg 的蛋白酶K 加入到9.5 mL 水中,轻轻摇动,直至蛋白酶K 完全溶解。不要涡旋混合。

  加水定容至10 mL,然后分装成小份储存于-20℃。

  A.3 沉淀液Ⅰ

  1 mol/L Tris-HCl (pH 7.5) 0.5 mL

  10 % CTAB 10 mL

  0.1 mol/L EDTA 1.0 mL

  定容至100 mL。

  A.4 氯化钠溶液(1.2 mol/L)

  称取70.128 g 氯化钠,加去离子水定容至1 L。

  A.5 乙酸钠溶液(3 mol/L)

  称取246.09 g 乙酸钠,加去离子水定容至1 L。

  A.6 裂解液Ⅱ

  1 mol/L Tris-HCl (pH 8.0) 0.75 mL

  10 % CTAB 15 mL

  NaCl 5.844 g

  0.1 mol/L EDTA 1.5 mL

  定容至100 mL。

  7

  A.7 沉淀液Ⅱ

  1 mol/L Tris-HCl (pH 8.0) 0.5 mL

  10% CTAB 10 mL

  0.1 mol/L EDTA 1.0 mL

  定容至100 mL。

  A.8 TBE 溶液

  称取 Tris 54 g、硼酸 27.5 g,0.5 mol/L Na2-EDTA(pH 8.0)20 mL 置于 1 L 烧杯中,加入双蒸水

  1 000 mL,充分搅拌混匀,得到 TBE 溶液(1×),室温保存。

  A.9 溴化乙锭(Ethidium Bromide, EB)

  用去离子水配制成10 mg/mL 的浓缩液。用时每100 mL 琼脂糖凝胶中加10 μL。

  8

  附 录 B

  (规范性)

  8 种海参基因参考序列 5’-3’

  B.1 日本仿刺参(Apostichopus japonicus)基因参考序列

  ATAATGATAGGAGGATTTGGTAAATGATTAATTCCTCTAATGATAGGTGCTCCAGACATGGCTTTCCCA

  CGAATGAAAAAAATGAGATTTTGACTAATACCTCCCTCCTTCATTCTTCTTCTTGCCTCTGCAGGAGTTGAAA

  GAGGGGCCGGAACAGGGTGAACAATTTACCCTCCACTCTCAAGCAATATTGCCCACGCAGGAGGATCTGTTG

  ACCTAGCTATTTTTTCACTACACTTGGCTGGTGCCTCCTCAATTCTAGCTTCCATAAAATTCATAACCACAATT

  ATTAAAATGCGGACTCCGGGGATAACTTTTGATCGACTTCCCTTATTCGTGTGATCCGTATTTATAACTGCTAT

  TCTTTTACTTCTGAGCCTTCCAGTACTAGCTGGAGCTATAACGATGTTACTAACGGACCGTAAAATTAAAACA

  ACTTTTTTTGACCCAGCAGGTGGAGGAGACCCAATATTGTTTCAACACTTGTTCTGATTCTTCGGACACCCAG

  AAGTTTATATTTTAATACTACCTGGATTTGGTATGATCTCTCACGTTATAGCACATTATAGAGGCAAGCAAGA

  ACCCTTCGGTTATTTAGGTATGGTGTATGCCATGGTGGCTATAGGGATACTAGGATTTCTTGTTTGGGCCCAC

  CATATGTTTACTGTTGGTATGGATGTAGACACACGAGC

  注:横线标记的序列为上、下游引物位置。

  B.2 海地瓜(Acaudina molpadioides)基因参考序列

  ATAATGATAGGAGGGTTTGGAAAATGACTAATTCCACTAATGATAGGAGCACCTGACATGGCTTTCC

  CACGAATGAACAACATGAGCTTCTGACTAGTACCCCCATCATTTATTTTATTACTAGCATCCGCAGGAGTG

  GAAAGAGGTGTAGGAACAGGTTGAACTGTTTACCCACCACTATCAAGAAACATAGCACATGCAGGAGGA

  TCAGTAGATCTAGCCATATTTTCTTTACACCTTGCTGGAGCATCCTCTATACTAGCCTCCATCAACTTCATT

  ACAACCATTATTAATATGCGTACCCCAGGAATCACATTTGACCGACTTCCATTATTTATTTGATCAGTATT

  TATAACTGCTTTTCTTCTACTGCTGAGACTTCCAGTACTAGCAGGAGCAATCACAATGCTACTAACAGACC

  GAAAAATAAAAACAACATTCTTTGACCCAGCAGGAGGAGGTGACCCAATCCTATTTCAACACCTATTCTG

  ATTCTTTGGTCATCCAGAAGTTTATATCCTTATACTCCCAGGATTCGGTATGATCTCCCATATTATAGC

  ACACTATAGAGGTAAGAAGGAACCTTTTGGTTATCTAGGTATGATATATGCTATGGTAGCTATAGGA

  ATACTAGGTTTCCTAGTATGAGCACACCATATGTTTACAGTCGGAATGGACGTAGACACACGAGC

  B.3 黑海参(Holothuria atra)基因参考序列

  ATAATGATAGGAGGATTTGGAAATTGACTTATACCCCTGATGATAGGAGCCCCTGACATGGCATTTC

  CCCGAATGAATAAAATGAGCTTTTGATTAGTTCCTCCCTCCTTCATCTTACTTCTAGCATCAGCAGGAGTA

  GAAAGAGGTGTCGGGACCGGATGAACAATCTACCCTCCCTTATCCAGAAAAATAGCTCACGCCGGAGGA

  TCAGTAGACCTTGCTATCTTTTCTTTACATCTAGCAGGAGCCTCCTCCATACTAGCTTCCATAAAATTTATA

  ACAACCATTATAAACATGCGCACTCCAGGAATAACCTTTGACCGTCTCCCACTATTCGTATGGTCTGTATT

  TATAACTGCATTTCTTCTCCTTCTTAGCTTGCCGGTGCTAGCAGGAGCCATAACTATGCTCCTAACGGACC

  GAAACATAAAAACAACTTTCTTTGACCCAGCAGGAGGAGGAGACCCCATTTTATTTCAACACCTGTTTTG

  ATTCTTCGGGCATCCAGAAGTATATATACTTATCTTACCTGGATTCGGAATGATATCCCACGTCATCGCTC

  9

  ACTACAGAGGTAAGCAAGAACCCTTCGGATACCTTGGTATGGTTTACGCTATGGTAGCCATAGGAATACT

  AGGGTTCTTAGTATGGGCCCACCACATGTTCACCGTAGGTATGGACGTAGACACACGAGC

  B.4 红海参(Parastichopus californicus)基因参考序列

  ATAATGATAGGAGGGTTTGGTAAATGACTAATTCCTCTAATGATAGGTGCCCCAGACATGGCTTTCCCC

  CGAATGAAAAAAATGAGATTCTGGTTAATACCCCCCTCCTTTATTCTTCTTCTTGCTTCTGCAGGAGTTGAAA

  GAGGGGCCGGGACAGGTTGAACAATCTACCCTCCCCTCTCGAGCAATATTGCCCACGCAGGGGGATCCGTTG

  ACCTAGCAATTTTTTCCCTACACTTAGCCGGTGCCTCCTCAATTTTAGCCTCCATAAAATTTATTACCACTATT

  ATTAAAATGCGGACCCCAGGTATAACTTTTGACCGACTTCCTTTATTTGTCTGATCCGTTTTCATAACTGCTAT

  TCTTCTTCTTCTAAGCCTTCCAGTTCTAGCCGGTGCAATAACAATGTTATTAACGGACCGGAAAATTAAAACA

  ACTTTCTTTGACCCAGCAGGTGGAGGAGATCCAATACTATTTCAACACTTGTTCTGATTCTTCGGACACCCAG

  AAGTTTACATATTAATACTCCCTGGCTTTGGTATGATCTCACATGTTATAGCGCACTATAGAGGTAAGCAAGA

  ACCCTTCGGTTATTTAGGTATGGTATATGCCATGGTAGCTATAGGGATACTAGGATTCCTAGTTTGAGCCCAC

  CATATGTTTACTGTTGGTATGGACGTAGACACACGAGC

  B.5 小梅花参(Thelenota ananas)基因参考序列

  ATAATGATAGGAGGGTTTGGCAACTGACTTATACCATTAATGATAGGAGCACCAGACATGGCCTTCCCT

  CGAATGAACAACATGAGATTTTGACTAGTTCCTCCATCCTTCATTTTACTTTTAGCCTCAGCAGGAGTAGAAA

  GAGGAGCCGGAACAGGATGAACCATCTACCCACCACTATCAAGAAAAATTGCTCACGCAGGAGGATCAGTC

  GACTTAGCAATTTTCTCCCTTCACTTAGCAGGAGCATCATCTATTCTAGCCTCCATAAAATTTATAACAACAGT

  TATAAAAATGCGAACCCCTGGAGTTACGTTTGACCGATTACCTCTATTTGTTTGATCCGTCTTTATCACCGCAA

  TCCTCCTGCTGCTGAGACTCCCAGTCCTAGCAGGAGCCATAACTATGCTCCTAACTGACCGGAAAATAAAAA

  CAACCTTCTTCGACCCTGCTGGAGGAGGAGACCCCATCCTATTCCAACACCTATTCTGATTCTTCGGACACCC

  AGAGGTTTACATTCTAATACTTCCTGGGTTCGGAATGATATCCCACGTAATAGCTCACTACAGAGGGAAGCA

  AGAACCATTCGGATATCTAGGTATGGTGTATGCAATGGTCGCTATAGGTATACTAGGTTTCCTTGTATGAGCA

  CACCATATGTTCACTGTGGGAATGGACGTAGACACACGAGC

  B.6 蛇目白尼参(Bohadschia argus)基因参考序列

  ATAATGATAGGAGGGTTTGGAAACTGACTTATACCTCTAATGATAGGAGCCCCTGATATGGCATTCC

  CCCGAATGAACAAAATGAGCTTCTGGTTAGTCCCTCCCTCTTTCATTCTACTCCTAGCATCAGCAGGAGTG

  GAAAGAGGTGTCGGAACCGGATGAACAATTTACCCACCCTTATCCAGAAAAATAGCCCACGCCGGAGGG

  TCAGTAGACCTCGCTATTTTTTCTCTACATCTAGCAGGAGCCTCTTCCATACTGGCCTCCATAAAATTTATA

  ACAACTATCATAAATATGCGCACTCCAGGAATAACTTTTGACCGCCTTCCATTATTCGTATGATCTGTATT

  CATAACTGCATTTCTTCTTCTCCTCAGCCTACCAGTGCTAGCAGGAGCTATAACTATGCTCTTAACGGACC

  GGAACATAAAAACAACCTTCTTTGACCCAGCAGGAGGAGGGGATCCCATCTTGTTCCAACACTTATTCTG

  GTTCTTCGGACACCCAGAAGTGTACATACTTATTTTACCTGGGTTCGGAATGATATCCCATGTCATTGC

  TCACTACAGAGGAAAGCAAGAACCATTCGGATACCTCGGAATGGTTTACGCCATGGTAGCCATAGG

  GATACTAGGATTCTTAGTATGAGCTCACCACATGATGGACGTAGACACACGAGC

  10

  B.7 四边刺参(Isostichopus badionotus)基因参考序列

  ATAATGATAGGAGGCTTTGGCAACTGACTTATTCCTTTAATGATTGGTGCTCCTGACATGGCTTTTCC

  ACGAATGAACAACATGAGTTTTTGGTTAGTACCACCTTCTTTTATTTTACTTCTAGCCTCAGCCGGAGTTG

  AAAGAGGAGCCGGAACTGGATGAACCATTTACCCTCCACTATCTAGTAATATAGCCCACGCAGGAGGAT

  CCGTAGATCTTGCTATTTTTTCACTTCACTTAGCAGGTGCCTCCTCGATACTCGCTTCAATTAACTTTATTA

  CAACCATAATAAAAATGCGAACCCCAGGTGTTACCTTTGATCGACTACCATTATTTGTTTGGTCAGTCTTT

  ATAACAGCATTTCTTTTATTGCTTAGACTACCGGTCCTTGCAGGAGCTATAACTATGCTCCTTACAGACCG

  AAAAATAAAAACAACCTTTTTTGACCCAGCTGGAGGAGGAGACCCTATTCTATTTCAGCACCTCTTTTGAT

  TTTTTGGTCATCCAGAAGTATATATTCTTATTCTTCCTGGATTTGGTATGATTTCTCACGTAATTGCGCATT

  ATAGAGGTAAGCAAGAACCCTTTGGTTACTTGGGAATGGTTTATGCTATGGTAGCCATAGGAATTTTAGG

  ATTCCTTGTATGAGCCCACCACATGTTTACAGTGGGAATGGACGTAGACACACGAGC

  B.8 褐斑刺参(Australostichopus mollis)基因参考序列

  ATAATGATAGGAGGCTTCGGAAAATGGCTGATTCCACTTATGATAGGGGCACCGGATATGGCCTTCC

  CACGAATGAAAAAAATGAGATTCTGGCTGATTCCCCCATCTTTTATACTTCTTCTAGCTTCTGCTGGAGTC

  GAAAGCGGAGCAGGTACCGGATGAACTATATACCCTCCACTGTCTAGAAAAATAGCACATGCCGGTGGA

  TCGGTAGACCTTGCTATATTCTCCCTTCATTTAGCTGGGGCATCTTCTATTTTAGCTTCAATAAAATTTATA

  ACCACCATTATTAACATGCGAACCCCAGGAATAACGTTTGACCGACTCCCACTATTCGTATGGTCTGTTTT

  TATAACTGCTTTTCTACTGCTACTAAGCCTTCCAGTATTAGCCGGTGCCATAACTATGTTGTTAACGGATC

  GTAATATAAAAACAACGTTTTTTGATCCTGCTGGTGGAGGAGACCCTATACTCTTCCAACACTTATTTTGG

  TTCTTTGGTCACCCAGAGGTATATATTCTTATCTTGCCTGGATTTGGTATGATATCACACGTGATAGCACA

  TTATAGAGGAAAGCAGGAACCGTTTGGTTATCTAGGAATGGTTTATGCCATGGTAGCCATAGGAATACTA

  GGATTTCTAGTCTGGGCTCACCATATGTTTACTGTAGGTATGGACGTAGACACACGAGC

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